2 结果与讨论
2.1 色谱条件的超高串联选择
2.1.1 色谱柱
亲水作用色谱（HILIC）在针对强极性及强亲水性化合物的保留方面具有优势，可以较好地分离氨基酸等具有生物活性的效液相色极性物质。经过对多个色谱参数的谱–优化，HILIC色谱柱分离必需氨基酸的质谱中种效果要优于C18柱，且降低了基质效应的法测影响，峰形得到优化，定马拖尾现象明显减少，铃薯因此最终选择AccucoreHILIC色谱柱。必需
2.1.2 流动相
甲酸和高比例水相均可提高离子化率，氨基通过对比发现等度洗脱与梯度洗脱无明显差异，超高串联所以采用含0.1%（体积分数）甲酸的效液相色55%（体积分数）甲醇水溶液进行等度洗脱。
2.2 质谱条件优化
采用蠕动针泵，谱–以10μL/min的质谱中种流量，依次将1μg/mL单一标准品溶液与流量为200μL/min的法测流动相通过三通接头混合后，直接注入质谱仪，定马在质荷比m/z为100～500扫描范围内，以ESI+模式，进行一级质谱扫描，调节离子源温度、喷雾电压、离子传输管温度和气体流量等质谱参数，确定8种必需氨基酸的母离子。结果表明，8种必需氨基酸的母离子均为［M+H］+峰。确定母离子后，分别对其进行二级质谱扫描，选择合适的轰击能量，确定定量离子和定性离子。优化后8种必需氨基酸的MRM质谱参数见表1。
2.3 样品前处理方法优化
2.3.1 提取溶剂的选择
在样品中分别加入0.01mol/L盐酸（pH=2）、60%（体积分数）乙醇溶液、含0.1%（体积分数）甲酸的25%（体积分数）甲醇溶液和超纯水，再经过1.3样品处理步骤进行提取，检测后发现超纯水的提取效率更高，因此选用超纯水为提取液。
2.3.2 称样质量的选择
分别测试了0.2g、0.5g和1g3种取样量，由于马铃薯中氨基酸含量较大，为避免取样量过小而导致误差增大，所以最终确定取样量为1g，然后增大稀释倍数。
2.4 线性方程和检出限
将1.3.2中8种必需氨基酸的系列混合标准工作溶液按照1.2色谱及质谱工作条件进行测定，以各物质的峰面积为纵坐标（y）、8种必需氨基酸的质量浓度为横坐标（x），绘制标准工作曲线。当取样量为1g时，以信噪比分别为3和10时的进样浓度为方法的检出限和定量限。8种必需氨基酸的线性范围、线性回归方程、线性相关系数、方法检出限和定量限见表2。由表2可知，8种必需氨基酸在各自的质量浓度范围内有良好的线性关系，线性相关系数为0.9990～0.9996，检出限为0.04～1.50mg/kg，定量限为0.12～4.99mg/kg，表明该方法具有较高的灵敏度。
2.5 精密度与加标回收试验
按照1.3方法对样品进行处理，在1.2仪器工作条件下测定马铃薯样品中8种必需氨基酸的含量，作为本底值。再精密称取已处理好的马铃薯样品18份，分别进行3个浓度水平的加标回收试验，在1.2仪器工作条件下，对每个水平进行6次平行测定，8种必需氨基酸的精密度与加标回收试验结果见表3。由表3可知，8种必需氨基酸的平均加标回收率为89.9%～115.1%，测定结果的相对标准偏差为0.4%～4.6%，表明该方法具有较高的精密度和准确度，满足分析要求。
2.6 实际样品测定
选取４种不同品种及产地的马铃薯，按照1.3方法进行样品处理与制备，在1.2仪器工作条件下进行测定，马铃薯样品中8种必需氨基酸试验结果如表4所示。由表4可知，不同产地的4种马铃薯均含有丰富的必需氨基酸，其中，赖氨酸的含量高于其它几种必需氨基酸，而赖氨酸被誉为人体第一必需氨基酸，2007年，WHO/FAO/UNU专家委员会确定成人赖氨酸每天需要量为30mg/kg，食用马铃薯可以很好地提高赖氨酸及其它必需氨基酸的摄入量。
3 结语
建立了同时测定马铃薯中8种必需氨基酸的超高效液相色谱–串联质谱法。该方法样品处理简单、灵敏度高、检测效率高，有良好的稳定性和准确度，可为其它种类的马铃薯及其食品中必需氨基酸的检测提供参考，并可为马铃薯品种育种及优选提供重要依据。
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